199293-83-9

Cas 199293-83-9 吖啶酯（NSP-SA-NHS）和相關化合物已被證明是非常有優勢的化學發光標記物，穩定性，活性和敏感性超過了那些放射性同位素。吖啶酯能與任何含有氨基的蛋白發生反應（見圖1）。在堿性條件下，NHS將會離去，吖啶酯將會以一個穩定的酰胺鍵與蛋白質結合形成吖啶化合物。反應完成后，多余的吖啶鹽通過脫鹽柱除去。在存在堿性過氧化氫，吖啶標記的蛋白不需要酶催化可自行發光。加入激發試劑后，體系立即釋放光子，可以用430nm標準光度計檢測。這個發光過程是十分短暫（整個過程的發生小于2秒），觸發方案必須增加內部光度計和光子探測器。蛋白質，多肽，抗體，核酸都可以用吖啶標記。標記化合物在堿性過氧化氫的激發下快速發光，通過收集光子可以檢測到標記化合物。

主要用途： 化學發光及免疫分析、受體分析、核酸及多肽檢測等研究。

發光原理

在堿性H2O2溶液中,吖啶酯受到過氧化氫離子的進攻,生成一個有張力的不穩定的二氧乙烷,進一步分解成CO2和電子激發態的吖啶酮,當吖啶酮回到基態時發出最大吸收波長430nm的光子.

產物特點

1 發光反應在形成電子激發態中間體之前,聯結于吖啶環上的不發光的取代部分與發光部分分離,因而其發光效率基本不受取代基結構的影響.

2 不需催化劑,也不需要增強劑,在有H2O2的稀堿性溶液中即可發光.

3 其發光類型為閃光型,加入激發液后,0.4s左右發光強度達最大,半衰期0.9s左右.

產品優點

1 背景發光低,信噪比高

2 發光反應,干擾因素少

3 光子釋放快速集中,發光效率高,發光強度大

4 易與蛋白偶聯,偶聯后光子產率不減少,增加靈敏度,2-8℃可以保存數月之久

5 固相分離劑為極細的磁粉,除增大包被面積,加快反應外,亦可同時清洗.

產品穩定性

1 在酸性溶液中(pH<4.8)都很穩定,與蛋白質偶聯物在室溫下保存4周,其光量子產率不降低,凍干品在-20℃下,可以保存一年以上.

2 當pH>4.8,尤其在堿性溶液中,吖啶化合物由于部分發生水解降低了其穩定性,水解過程為不發光的暗反應過程;水解程度隨pH增大而增大,隨溫度的升高而增大.

3 吖啶酰胺穩定性較高于吖啶酯結構,抗水解能力較強.

4 吖啶環或酚環或苯磺酰環上連有甲基等給電基團,由于空間位阻大,熱穩定性增加;連有吸電子基團,有利于親核取代反應而使其穩定性下降.

5 部分用戶反饋蛋白標記后,過段時間發光量有所下降,建議:

偶聯后保存用的緩沖液盡量用弱酸性的緩沖液,鼓氮氣除去其中的氧氣.密封避光低溫保存.有條件的可以制成凍干樣再保存

圖1.吖啶脂標記化學及其化學發光。 

產品答疑

1 吖啶酯在DMF中的溶解度最大值多少?

答:吖啶酯用DMF最高溶解的濃度:4mM

2 避光的要求嚴格嗎？有沒有具體的研究數據，比如多長時間光照，信號衰減多少之類的？

答: 發光標記物在光照條件下有可能部分分解,以致影響發光效果.吖啶酯的實驗操作和儲存建議避光條件下處理,目前暫時沒有具體的研究數據.

    吖啶酯在堿性和氧化環境下均不穩定,易分解.

3 吖啶酯除了DMF還可以用什么溶劑來溶解?

答:除了DMF,也可以用無水DMSO等非質子性溶劑來溶解.

4 吖啶酯的溶劑有什么要求?

答:標記前:由于吖啶酯末端羧基經NHS活化,較為活潑,請用非質子性的干燥無水溶劑來溶解;

   標記后:標記后吖啶酯與被標記物之間以酰胺鍵或者酯鍵等形式存在,質子性溶劑基本沒有太大影響;吖啶酯本身活性位點在堿性和氧化環境下不穩定,此時應根據被標記物的穩定性配制相應的非強堿性非氧化的體系中處理.

5 吖啶酯標記后如何分離純化?

答: 吖啶酯標記蛋白等大分子化合物建議用G25脫鹽柱分離;

    吖啶酯標記小分子化合物建議用柱層析分離;

6 吖啶酯標記參考實驗?

答: 吖啶酯標記試劑盒的說明書對吖啶酯標記蛋白的實驗的提供了較為詳盡的參考,可以參考以下附件:

吖啶酯化學發光免疫分析方法用于HIV-1p24抗原檢測的研究

http://www.docin.com/p-90856609.html

Heliosense 吖啶酯蛋白標記試劑盒說明書-復件.pdf

7 吖啶酯標記效率如何計算?

答: 吖啶酯標記效率可以參考以下計算方法進行計算評估

8 吖啶酯標記化學發光檢測儀器推薦

美國PE公司的 Wallac 1420 多功能檢測儀,

德國西門子拜耳化學發光儀ADVIA Centaur